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※ 引述《tony15899 (急速せんこ~)》之銘言:
: ※ 引述《scy2468 (scy)》之銘言:
: : 目前發現問題:
: : 分析物(較親水的)滯留時間會改變,提前流出,而且時而正常時而不正常。
: : 正常時分析物的感度訊號良好與以往同
: 你的問題看起來是沒有設定層析梯度的平衡時間,
: 假設方法是從20%甲醇逐漸升到100%甲醇後結束,
: 當沒有設定平衡時間時,即便到下一針前pump會回到20%甲醇狀態,
: 但這時間太短所以並不足以把管柱內流洗夜全部置換成20%甲醇,
: (所以管柱內溶液甲醇比例會高於20%)
: 當你下一次進樣後因為管柱內甲醇比例較高,波鋒會觀察到滯留時間往前移
: 解決方法是設定一段平衡時間,舉例:
: 時間(mins) 甲醇比例
: 0 20%
: 10 100%
: 15 100%
: 16 20%
: 25 20%
: 16~25分鐘就是平衡管柱時間,這段時間要多久不一定
: 你可以嘗試設定5或10分鐘(可能更久),只要滯留時間不再飄移就可以
: 很多文獻方法不會顯示平衡的時間,這點要特別注意
首先就跟Tony哥說的依樣,因為你跑的是梯度,所以在設計流速時
最後要讓他回到你的初始梯度然後讓它平衡。
這時平衡的時間自己抓,不見得多久,通常是第一次在連續打,
就可以抓要平衡多久才夠。
然後這只是為了讓你每次出來的差異性不要那麼大而已,
至於你說的死柱還有14天後有差異的問題,
以我自己的經驗來說,或者說被老師罵的經驗來說,
只平衡一個小時太短了.........
建議前一天下午先安裝好正常速度流洗2小時,我當初是用1ml/min2小時,
然後調成低流速讓他OVER NIGHT,偵測器不要開喔,只是在平衡管柱.......
然後~~~~為了保險,拜託每次移動相,如果可以最好都配新的,
用固定瓶子洗乾淨>震盪>DD>溶液>震盪>裝配好的溶液>除氣
然後裝上去後照步驟慢慢洗,不要馬上裝管柱最後才洗管柱
然後電磁閥最好在剛開始時,假如你家最多可以四溶液,
最剛開始洗PUMP和混和時,筏打開,四個電磁閥都讓他動
因為經驗是,如果你只用兩個,其實另外兩個洞不夠緊,
偶爾的小氣泡還是有機會影響結果。
上面是前面
接下來說測完後,清洗部分一樣一個小時~1.5小時太短,
如果可以請盡量照說明書的清洗容量
也就是120ml~200ml左右
當然偷懶方法就是找個兩天花個時間,做完實驗低極性比例跑一次,高極性比例跑一次
跑完確定都沒東西全平,再用那個作依據來清洗,
清洗方式建議假設 水/甲醇 50/50>90/10>10/90(洗久一點)
接下來看你喜歡用哪個比例了,我會轉成100%甲醇充滿容積保存
會這樣是因為,如果你是做天然物酸鹼變化,那有時會有極少量到檢測不出來的量
卡管柱,如果真的卡管柱時間和東西都很怪,
就乖乖用水/甲醇 50/50>90/10>10/90>你的移動相比例>測一針>平衡一晚
經驗上就會好很多。
不過那個比例要自己試。
大概就這樣~~~~~
至於為啥會卡柱,我也不懂 囧
甚至到最後,因為我做的除了出來的一個未知物外有標準品,又用光譜偵測器
老師都叫我只要比對當次實驗的滯留時間,其他的看光譜比對去判斷就好.......
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