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可利用AnnexinV,以流式細胞儀或染色的方式做第一階段的偵測。 ... pi染色原理 流式細胞儀細胞凋亡判讀 annexin v pi染色原理 annexin v pi染色步驟 流式細胞儀判讀 sub ... ... <看更多>
annexin v pi染色原理 在 Re: [討論] 關於Annexin V - 看板Biotech - 批踢踢實業坊 的推薦與評價
※ 引述《DarkBANG (波希米亞狂想曲)》之銘言:
: ※ 引述《linwei (我會好好加油^^)》之銘言:
: : 請問
: : 這樣我可以解釋為 細胞都已經壞死
: : 因此annexin V 無法染上嗎?
: 不行...necrosis的細胞爆掉膜也是會外翻的
: 所以necrosis也會是Annexin V+
: 從圖來看我會建議你gate的範圍往左邊一些
: 或是先去gate FSC和SSC的去除左下那群再畫
: (個人認為...FLOW的gate範圍是一門藝術....XD)
同時畫gate也是很黑暗的自由心證 科科
只能說要憑著良心做
: : 但是我又有查一些paper
: : 他們是利用Annexin V 與 PI 雙染的方式
: : 有染上annexin V 與 PI 的表示為壞死的細胞
: : 這樣表示說壞死的細胞annexin V 還是可以染阿?!
: 最好先了解一下Annexin V和PI的染色原理
: 然後想一下apoptosis和necrosis如何區分
: 這樣你就會知道為什麼你的解釋是行不通的
這是幾個月前有人present看不懂 所以打成word解釋
至於要如何調gate ...這種東西很難紙上說明= =a
要鞭可以鞭大力點= =a
───────────────────────────────────────
隨便Google到的圖
https://bioop.com/upimg/allimg/20061019/1055340.jpg
利用Annexin V and PI stain偵測apoptosis
原理:
1.細胞初期apoptosis時 細胞膜中的PS(phosphatidyserine)會由細胞膜內側外翻至細胞\
膜外側
2.Annexin V蛋白對PS具有高度親合性
利用以上兩點在annexin V上面接上螢光物質 就可以偵測細胞是否有spoptosis現象
圖表解說
Y軸 染PI
│ │
│ │
│ │
+│ │
├───┼─────
│ │
-│ │
│ │
└───┴─────X軸 染Annexin V
- +
把PI跟Annexin V一起染
-(Negative)區域代表沒有螢光訊號 也就是沒有PI或者annexin V附著
+(positive)區域代表有螢光訊號
所以上面那張圖可以更詳細分為四個區域
左下: PI跟Annexin V皆沒有訊號
通常這代表正常細胞
因為細胞膜沒有破裂PI無法進入染細胞核
PS也沒有外翻 所以annexinV也無法附著 也就沒有訊號
右下: PI沒有訊號 但Annexin V有訊號
這區代表開始apoptosis的細胞
因為才剛開始 細胞膜還沒完全破裂 所以PI進不去
但PS已外翻到細胞外膜 所以會有Annexin V訊號
右上: PI跟Annexin V都有訊號
這區代表apoptosis末期的細胞
因為到了apoptosis末期 細胞膜破裂 PI可以進入染細胞核
同時PS也外翻到細胞膜外
左上: PI有訊號 annexin V沒有訊號
通常這區為necrosis (這是通常的說法 也有可能是雜訊)
因為細胞急速被破壞來不及或無法啟動apoptosis機制
細胞膜會被破壞(外力或者化學物質) PI可以偵測到
但PS一樣還留在膜內 所以annexin V無法偵測到
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