【新年科普：好的！武漢肺炎，不是所有疫苗都一樣】
圖文：3Q 陳柏惟
（ 去年此時，我們追蹤過口罩外銷的議題，一年過後，在大家開心過年同時，包含醫護等許多人仍要堅守一線的防疫工作，但卻有一群人極力要求台灣進口中國疫苗。到底中國疫苗有什麼問題？立委陳柏惟不從政治，而是從醫學科普角度來幫大家剖析，值得一讀！）
前總統馬英九在大年初一這天，再次高唱「立刻停止稱呼武漢肺炎」（好的，中國武漢肺炎），「政府絕對不要拒絕中國疫苗」，對於外界質疑，馬英九則以「操弄仇中」回應。然而，我這邊要敬告馬總統所屬的舔中集團，「立刻停止吹捧危險的中國疫苗」，不要用潛在有危險的中國疫苗害死台灣人！
如果我們稍微有點印象，馬某人和江啟臣主席、連勝文公子、陳文茜等親中媒體人連番要求違法進口中國疫苗的舉動，其實和去年此時，中國黨一夥小丑重砲抨擊口罩禁止出口、要求放鬆邊境管制SOP的作法是一樣的，就是要打亂世界最強的台灣防疫，恐破我國防線，簡單來說，就是共產黨的「第五縱隊」，台灣的內賊。
在我國接連取得COVAX首波配送疫苗（20逾萬劑牛津疫苗），以及買到505萬劑莫德納（Moderna）疫苗，並和國產疫苗商也簽訂合約之後，馬某等人還繼續要求進口中國疫苗，簡單說就是騙騙外行人。
我必須嚴正的告訴大家，政治人物有義務把話講清楚，「#不是叫疫苗的就都一樣」，在世界市場可取得的疫苗中，中國眾疫苗是技術最落後、實驗數據最不透明、醜聞也最多的疫苗。然而，中國卻用搶快製造的這些疫苗，打壓異己，擴張地緣政治版圖，這是中國繼刻意隱瞞疫情、先搶購防疫物資，輸出病毒後，又一起「以役謀霸」的企圖！
中國黨的政客缺乏智識不是新聞，但是大家不可以有樣學樣，這邊我們還是要來了解一下各種疫苗的差異：
疫苗的用途，是在人體感染病原體前先誘發「#免疫記憶」，當病原體真的進入人體時，就會快速激發免疫反應而被消滅。那麼，免疫系統辨認的什麼呢？並不是整顆病毒，而是病毒上特定的抗原，或更具體的來說，是分子基團組成的抗原決定位(epitope)。要製造疫苗，最好的就是能選擇到一些能誘發高濃度有效抗體、又較不容易突變的抗原決定位，把這樣的抗原大量在體內表現，就能有效刺激免疫系統。
反之，如果我們丟進大量沒用的抗原，製造出的抗體就不能中和武漢病毒，甚至可能因引發免疫失調，造成過敏反應而加重肺部疾病。李秉穎教授稱這種誘發「抗體增強反應」（antibody-dependent enhancement, ADE）的無效抗體為「內奸抗體」，我建議大家都看一下李教授的文章，或是去年9月自然微生物（Nature microbiology）上的一篇論文。
目前已開發的武漢肺炎疫苗，根據原理分為四種：
1. #RNA疫苗
原理：將能製造病毒棘狀蛋白（spike protein）之mRNA送入人體，轉譯出棘蛋白，使免疫系統專一性的攻擊與記憶此蛋白。
優點：
1. 由於僅具備部分病毒mRNA，且不會進入人體細胞核，故無感染力。
2.目標專一，引發之抗體濃度高。
3. 針對變種病毒序列可快速改良
缺點：保存較困難，輝瑞需要保存在-70°C，Moderna要保存在-20°C。
代表：美國輝瑞-BioNTech、Moderna
2.#蛋白質疫苗
原理：使用重組之蛋白次單元，和類病毒奈米粒子結合送入體內，使免疫系統專一性產生抗體。
優點：
1. 直接送入病毒棘蛋白誘發免疫
2. 保存相對容易（儲存於2~8°C）
3. 安全性高
缺點：為了確定重組蛋白次單元具足夠免疫誘發力，開發時間較長
代表：Novavax（第一個有研究證實對南非變種病毒株有效的疫苗）、國產的高端疫苗高端MVC-COV1901 疫苗（以三聚體結構呈現的 S-2P 全長基因修飾重組棘蛋白為疫苗抗原，進入第二-三期臨床試驗中）、國光AdimirSC-2f（準備進入第二期臨床試驗）、聯亞生技UB612（針對棘狀蛋白結合人類IgG1之S1次單位RBD，理論上可對付變種病毒，進入第二期臨床試驗中）
3.#腺病毒疫苗
原理：用腺病毒（adernovirus）的殼，包著武漢肺炎的cDNA片段丟進去人體，再經過轉錄與轉譯出病毒蛋白。
優點：
1. 保存相對容易（儲存於2~8°C）
2. 成本較低
缺點：人類有很多都感染過腺病毒，可能會直接把疫苗中和掉而無法產生效用，比率高達40%。牛津、Janssen都特別採用異種或罕見腺病毒株來減少這種免疫干擾，但中國康希諾疫苗採用的Ad5則已有相當高比例族群感染過，效果可能不佳。
代表廠商：牛津/阿斯特捷利康疫苗（使用黑猩猩的ChAdOx1腺病毒，不容易被人類免疫系統中和），嬌生疫苗（使用較少見的Ad26腺病毒），中國康希諾生物(CanSino Biologics)和解放軍（使用常見Ad5腺病毒，容易被中和）
4.#減毒疫苗（中國大宗）
原理：直接拿整顆武漢肺炎病毒「減活」（用化學物質）讓病毒失去感染力製成。
優點：技術門檻最低，開發快，便宜。
缺點：
1. 誘發免疫反應較微弱
2.且誘發抗體種類多而濃度低
3. 減毒疫苗有可能產生嚴重併發症。
代表廠商：中國北京科興生物技術公司(Sinovac Biotech)、國藥集團、武漢生物製劑研究所(Wuhan Institute of Biological Products)/中國醫藥集團(Sinopharm)
在中國的緊急接種計畫中，在尚未發表第三期臨床試驗結果前，就已經有超過百萬人打了中國國藥集團的疫苗，但試驗結果都未完全發布
目前中國開發出要強迫推銷給台灣的疫苗，大多數是問題很大的減毒疫苗，可能產生不良反應的風險較高；就算是康希諾/解放軍疫苗，由於其腺病毒載體的選擇，效果也不會比牛津/阿斯特捷利康疫苗來得好，另外中國境內頻傳 「假疫苗」事件，中國警方近日破獲以生理食鹽水加工製成的假疫苗案，而少數「緊急使用授權」中國疫苗的國家，則出現疫苗保護力低，或不良反應比率高的通報。由於中國疫苗從設計學理上來看技術水準就低，疫苗試驗過程中又有許多不符合國際標準之處，其風險不確定性更大！
目前國內疫情控制得當，也已經獲得當今最優秀疫苗之一的Moderna疫苗，且國產幾隻疫苗的設計原理在誘發免疫反應與疫苗安全性上都屬較佳者，為何中國黨堅持要違反我國法規進口中國疫苗？ 而不是繼續配合防疫政策，穩健地在今年逐步完成疫苗施打？
中國黨費這麼大力氣，從要求口罩出口、要求檢討境管、或是早先想用普篩取代邊際隔離管制，都是經過高人指點，精準打擊台灣防疫體系的 「#政治飛彈」，目前我們不怕外敵，怕的就是內賊！未來還會有更多挑戰，重點在心頭抓乎緊，全民團結，那麼來亂的馬英九們等人的顛覆行動就終將失敗！
rna轉cdna濃度 在 [求救] 放大cDNA的一些問題- 看板Biotech - 批踢踢實業坊 的推薦與評價
因為最近要幫老師做專題遇到了一些問題...
有蠻多不懂的地方想請教一下板友
就是該實驗最後要用real time PCR 去定量看gene的表現量
而事前要將抽RNA後轉成cDNA 再拿cDNA去做real time
我們實驗室是用Trizol去抽...
照理說抽出來的應該是細胞內所有的RNA (包含mRNA rRNA)
而後用OligodT去轉cDNA ←應該是所有細胞中的mRNA都會被轉成cDNA對吧?
之後就將cDNA拿去用待測gene的primer去夾用PCR放大
因為目前還不知道要挑哪些gene出來測
所以我們BOSS是說
先把RNA抽出送去做PCR array再從中挑幾個用real time去檢測是否符合
我們BOSS說每個濃度只要做一管轉成cDNA就好
之後的real time都可以用那管去做
我的疑問是...今天待測基因約有5個
而且要做3重複 如果都從那管有整個細胞的mRNA轉成的cDNA取出 應該會不夠
那如果要將該管cDNA用PCR放大
那primer要怎麼辦? 因為你不知道那管cDNA的組成 那你要怎麼去放大全部的片段?
還有一個問題...就是我可以先把加藥處理完的細胞都抽RNA轉成cDNA
那以後就可以不用再養細胞 而只要從那管cDNA去做就好 這樣嗎 ??
這是第一次做PCR所以有很都不懂的地方...請大家幫忙看一下是否觀念有錯
謝謝^^
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◆ From: 114.39.3.19
※ 編輯: wayne841503 來自: 114.39.3.19 (01/30 00:18)
關於這實驗的設計是用同樣濃度的藥物不同的處理時間
來看藥物對細胞的傷害
有做了2hr 12hr 24hr三個時間點 每個時間點都有一個negative control
要去看不同的處理時間中 所選出的5個基因表現量是否與PCR array的趨勢相同
就拿2hr的來說好了...一管是有加藥 另一管是沒加藥
拿加藥那管來看 去抽RNA 所抽出來的不是total RNA嗎? 之後再用oligodT去轉cDNA
所轉出的應該是total mRNA吧?
也就是說那管cDNA中包含著
1.因藥物處理導致A gene表現產生的mRNA (先把待測gene當成A) 所反轉成的cDNA
2.原本就存在的mRNA 經反轉成的cDNA
是這樣嗎??
如果是的話...因為到時候可能要測到5個gene
我是怕先前抽的mRNA轉成cDNA後那管的量不夠用來測5個gene
之後是設計A gene的primer 拿去跑real time
用sybr green 去測A gene與housekeeping的表現量 來做相對定量
在去比較有加藥與未加藥兩管中 A gene是否有明顯上升這邊還有個疑問...剛剛去查了
RT-PCR
它可以把mRNA轉成cDNA ←但這不是ssDNA嗎?
還有protocal上 RT-PCR不像一般的PCR有denature→annealing→elongation 循環放大
那該不會一條A gene所產生的mRNA 只會轉成1條cDNA吧?
2條mRNA就轉出2條cDNA
那這樣的cDNA數不就等於你當時加下去RT-PCR前的mRNA量?
這邊看了protocal與資料後還是不懂...
如果是這樣的話我抽出RNA的total濃度約2ug/ul 260/280=1.93 共約30ul而已(每管)
那之後轉成cDNA不就也是那些量而已?
也就是說我到時候要養到5盤cell 轉5管cDNA 再分別拿去跑real time測各gene表現量這
樣嗎? ←BOSS跟我說只要每個時間點抽一管就可以測5個 但我不太懂他的意思
我一直覺得一管才20~30ul又要做到5個gene會不夠
麻煩幫我看一下...是不是我有想錯哪部分或是哪部分觀念有誤
目前一直卡在這邊轉不過=口=
拜託了> <
※ 編輯: wayne841503 來自: 114.39.10.71 (01/30 16:11)
※ 編輯: wayne841503 來自: 114.39.10.71 (01/30 16:12)
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